目的

       日温差（Daily temperature variation, DTV）是指一天中最高温度与最低温度之差，是气候变化相关的重要气象指标，能反映短期天气的稳定性。随着气候变化导致的极端天气事件发生的规模、频率和强度不断加强，越来越多的研究表明极端温度对精神健康构成了重大威胁。前额叶皮层在认知功能、决策、社会行为、情感调节和人格表达中起着至关重要的作用。前额叶皮层的损伤或功能障碍与焦虑抑郁相关。检索文献发现，DTV相关动物模型研究有限，DTV暴露是否导致焦虑抑郁样行为及可能的毒理作用机制尚不清楚。本研究利用雄性C57BL/6J小鼠探讨DTV暴露是否诱导及如何诱导焦虑抑郁样行为的机制，明确肠道微生物在神经炎症中的调控作用，为了解和预防DTV暴露诱导的焦虑抑郁提供科学理论基础。

方法

1.构建DTV暴露构型

      将120只C57BL/6J小鼠分为4组，暴露于不同的DVT：Control组（T=25℃，DTV=0℃, n=30）、Down-DTV组（T=15℃/25℃, DTV=10, n=30）、Up-DTV组（T=25℃/35℃, DTV=10℃, n=30）、DTV20组（T=15℃/35℃, DTV=20℃, n=30）。各组小鼠均饲养在人工气候培养箱，三个暴露组（Down-DTV组、Up-DTV组、DTV20组）连续暴露10天和20天，每天仅暴露于上述两个温度条件，每个温度持续12h，白天暴露于较高温度，晚上暴露于较低温度。在每个阶段暴露结束时，测小鼠体重并进行如下行为学实验：旷场实验、高架十字迷宫实验、悬尾实验和强迫游泳实验。

      选取暴露20天的小鼠，采用ELISA法检测小鼠皮质促炎因子TNF-α和血清促炎因子IL-1β。免疫荧光染色观察前额叶皮层小胶质细胞的活化状态。H&E染色观察前额叶皮层神经元的病理损伤。Western blot检测皮质血脑屏障紧密连接蛋白（Occludin和Claduin-1）的表达量。

      选取暴露20天的小鼠，采用H&E染色观察结肠病理改变，免疫组化染色观察结肠紧密连接蛋白（Occludin和Claduin-1）的表达水平，对小鼠粪便进行16S rRNA测序，筛选差异菌群。

      将健康小鼠的粪便通过灌胃的方式移植给三个暴露组（Down-DTV组、Up-DTV组、DTV20组）小鼠，Control组小鼠接受无菌1×PBS灌胃。粪菌移植持续20天。

      粪菌移植结束后，称量四个组小鼠体重并进行行为学检测。Western blot检测皮质紧密连接蛋白（Occludin和Claduin-1）的表达水平。ELISA检测血清IL-1β和皮质TNF-α。

      非靶向代谢组学分析血清中的差异代谢物及其关键代谢通路。

      采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析，对数据资料采用均数±标准差（